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    ELISA试剂及溶液配制及实验步骤

    发表时间:2023-12-18

    一、试剂与溶液

    1. 酶标板:ELISA实验常用的酶标板为96孔,每孔可加入100μl液体。在酶标板上方覆盖一层透明塑料膜,以减少空气污染。

    2. 抗体:根据实验目的选择特异性抗体,一般使用的是多克隆抗体。

    3. 酶标二抗:与抗体结合的酶标抗体,常用的有碱性磷酸酶(AP)、辣根过氧化物酶(HRP)等。

    4. 底物:常用的底物为邻苯二胺(OPD)、对硝基苯磷酸酯(pNPP)等。

    5. 终止液:常用的终止液为硫酸,可以终止酶促反应。

    6. 洗涤液:用于清洗酶标板和微孔板,一般使用的是磷酸盐缓冲液(PBS)。

    7. 抗体稀释液:用于稀释抗体,一般使用的是PBS。

    8. 酶标二抗稀释液:用于稀释酶标二抗,一般使用的是含10%小牛血清的PBS。

    9. 底物溶液:用于ELISA实验中的显色反应,一般使用的是OPD或pNPP底物溶液。

    10. 终止液:用于终止ELISA实验中的显色反应,一般使用的是硫酸。

    二、实验步骤

    1. 加样:将待测样本、抗体、酶标二抗加入酶标板中,用封口膜封住酶标板,轻轻摇晃,使液体充分混匀。

    2. 孵育:将酶标板置于37℃孵育一定时间,使抗原抗体充分结合。

    3. 洗涤:用洗涤液清洗酶标板,去除未结合的抗体和酶标二抗。

    4. 加底物:将底物溶液加入酶标板中,用封口膜封住酶标板,轻轻摇晃,使液体充分混匀。

    5. 孵育:将酶标板置于37℃孵育一定时间,使底物与抗体结合。

    6. 终止反应:用终止液终止显色反应。

    7. 检测:用酶标仪检测各孔的光密度值,记录数据并进行分析。

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